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HemoVoid™ LC-MS On-Bead: 제품명: HemoVoid™ LC-MS On-Bead; 용도: Hemoglobin Removal with On-Bead Digestion for Proteomics; 메이커: Biotech Support Group; 카달로그:

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소개

HemoVoid™ LC-MS On-Bead For RBC Proteomics

헤모글로빈 제거와 On-Bead 소화를 통합한 LC-MS 전처리 키트

HemoVoid™ LC-MS On-Bead 는 기본적으로 on-bead digestion 기반 LC-MS workflow 를 위해 설계되어 있어, elution buffer 는 기본 구성품에 포함되어 있지 않습니다. 따라서 일반적인 사용에서는 비드에 결합된 단백질을 그대로 유지한 상태에서 다음 단계의 on-bead digesion 을 진행합니다. 다만, 다른 proteomic 분석이나 별도의 소화 방식을 원할 경우에는 (0.25 M Tris + 0.5 M NaCl, pH 9-10) 조성의 elution buffer 를 별도로 준비하여 선택적으로 용출할 수 있습니다.

제품 특징

• 헤모글로빈 95% 이상 제거
• 동일 비드 상에서 저농도 단백질 농축 및 트립신 digesion 가능
• 30분 이내의 간단한 마이크로원심분리 프로토콜
• 추가 소화·탈염 단계 없는 간소화된 워크플로우
• iTRAQ 및 label-free LC-MS 와 호환
• Discovery 및 targeted proteomics 에 적합

실험 과정

1. 비드 준비: 비드를 binding buffer로 평형화

2. 시료 결합: RBC lysate 를 비드와 반응시켜 헤모글로빈은 배제하고 저농도 단백질 분획을 농축

3. 원심 분리: 비드와 비결합 분획을 분리하고 flow-through 회수

4. 세척 2회: 비특이적 결합 성분 제거 및 분리 효율 향상

5. On-bead Digesion: 기본 workflow 는 on-bead digesion 이며, 필요시 별도 준비한 elution buffer로 용출 가능

6. 환원 및 알킬화: 단백질 digestion 를 위한 전처리

7. 트립신 digesion: 비드에 결합된 단백질을 펩타이드로 분해

8. 펩타이드 회수 및 추가 추출물: 소화된 펩타이드 회수 및 잔여 펩타이드 추가 추출

9. LC-MS/MS 분석: 최종 펩타이드 분획을 LC-MS/MS에 적용

☞ HemoVoid™ LC-MS On-Bead Product Sheet 보기

주문정보

11. HemoVoid™ LC-MS On-Bead_주문정보.PNG

11. HemoVoid™ LC-MS On-Bead_주문정보2.PNG

관련자료

References

Human Red Blood Cells (RBC)

HemoVoid™ On Bead Digestion Application Work On RBC by Irene Granlund, Umeå University

Red Blood Cells, Plasmodium extracts

Machado, Patrícia Isabel Pires. Pyruvate kinase and glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiencies and their association with malaria–population genetics and proteomic studies. Diss. Universidade do Porto, 2013.

Walpurgis, Katja, et al. "Effects of gamma irradiation and 15 days of subsequent ex vivo storage on the cytosolic red blood cell proteome analyzed by 2D DIGE and Orbitrap MS." PROTEOMICS-Clinical Applications (2013).

P. Falciparum Clone 3D7 Cultured In Human Erythrocytes

Lasonder E, Green JL, Camarda G, Talabani H, Holder AA, Langsley G, Alano P. The Plasmodium falciparum schizont phospho-proteome reveals extensive phosphatidylinositol and cAMP-Protein Kinase A signalling. J Proteome Research. 2012;

Red Blood Cell Lysate

Barasa, Benjamin, and Monique Slijper. "Challenges for red blood cell biomarker discovery through proteomics." Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics 1844.5 (2014): 1003-1010.

Lange, Philipp F., Pitter F. Huesgen, Karen Nguyen, and Christopher M. Overall. "Annotating N termini for the Human Proteome Project: N termini and Nα-acetylation status differentiate stable cleaved protein species from degradation remnants in the human erythrocyte proteome." Journal of proteome research (2014).

Katja Walpurgis, Maxie Kohler, Andreas Thomas et al. Validated hemoglobin-depletion approach for red blood cell lysate proteome analysis by means of 2D-PAGE and Orbitrap MS. Electrophoresis.2012;

Mizukawa, B., George, A., Pushkaran, S. et al. Cooperating G6PD mutations associated with severe neonatal hyperbilirubinemia and cholestasis. Pediatric Blood Cancer.2011;56: 840-842.

Sudha Neelam, David G Kakhniashvili, Stephan Wilkens et al. Functional 20S proteasomes in mature human red blood cells Experimental Biology and Medicine.2011;236:580-591