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소개
HemoVoid™ 는 실리카 기반의 단백질 농축 매트릭스로, 적혈구 용해물 시료에서 헤모글로빈을 제거하는 동시에 저농도/ 저분자량 단백질을 농축할 수 있도록 설계된 제품입니다. 본 제품은 완화된 버퍼 조건을 사용하므로, 용출 분획 내 native 효소 활성이 유지됩니다.
개별 mixed-mode ligand 조합 (이온성, 소수성, 방향족, 고분자 기반)으로 구성된 실리카 기반 라이브러리에서 유래하였습니다. 이 라이브러리는 단백질과의 약한 결합을 유도하도록 설계되어, 출발 시료 내 단백질 구성을 미리 알지 못하더라도 매트릭스로부터 신속한 용출이 가능하도록 합니다. 그 결과 적혈구 용해물에서 헤모글로빈을 제거하는 동시에, 저농도 혈액 단백질의 분리 해상도를 향상시킵니다.
1. 비드 준비: 비드를 binding buffer로 평형화
2. 시료 결합: 시료를 비드와 반응시켜 헤모글로빈은 배제하고 저농도 단백질 분획을 농축
3. 원심 분리: 비드와 비결합 분획을 분리하고 flow-through 회수
4. 세척 2회: 비특이적 결합 성분 제거 및 분리 효율 향상
5. 용출: 비드에 결합된 단백질 분획을 elution buffer로 회수
6. LC-MS 분석: 회수된 분획을 후속 단백질 분석 및 LC-MS 에 적용
pH 3.5 - 10.0 범위에서 IEF를 수행한 뒤, 10% 아크릴아마이드 슬랩 겔을 이용하여 2차원 전기영동과 silver staining 으로 단백질을 분석하였습니다.
HemoVoid™ 용출물에서는 헤모글로빈이 현저히 제거되었으며, 나머지 적혈구 단백질은 더욱 농축되고 분리도가 향상되었습니다. 그 결과, 2차원 전반에서 더 많은 단백질이 검출되어 단백질 커버리지가 확대되었습니다.
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관련자료
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References
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