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소개
Phenotype Microarray 분석 개요
Biolog 사 Phenotype Microarray (PM) 분석은 미생물 세포의 대사활성 및 생리학적 상태를 분석하며,
이는 세포의 대사 활성을 광범위한 조건에서 측정하여 세포의 생리학적 프로파일을 생성하는 데 사용됩니다.
미생물학, 세포 생물학, 배양 조건 최적화, 바이오 공정, 유전자 기능 동정, 농업, 제약 등 다양한 분야에서 활용됩니다.
1. 96-웰 플레이트 기반
Biolog PM 시스템은 표준화된 96-well Microplate 를 사용하여 대사 분석을 수행합니다. 각 웰에는 특정 조건(기질, 환경 인자 등) 이
선택적으로 동결 건조 되어 있습니다.
• 플레이트 종류
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Microoplate |
Type of Cell |
Application |
Plate Map |
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PM1 - PM2 |
미생물 |
탄소원 이용능 테스트 |
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PM3 - PM8 |
미생물 |
질소, 인, 황 같은 대사원 분석 |
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PM9 - PM10 |
미생물 |
pH, 삼투압 스트레스 테스트 |
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PM11 - PM20 |
박테리아 |
항생제 민감도 테스트 |
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PM21 - PM25 |
효모/진균 |
항진균제 민감도 테스트 |
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GEN III Microplate |
박테리아(호기성) |
탄소원 이용능, pH, 삼투압, 항생제 민감도 |
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AN Microplate |
박테리아(혐기성) |
탄소원 이용능 테스트 |
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YT Microplate |
효모 |
탄소원 이용능 테스트 |
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FF Microplate |
진균 |
탄소원 이용능 테스트 |
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PreBioM1 |
장내 마이크로바이옴 |
단당/이당프리바이오틱 기질 이용능 |
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PreBioM2 |
장내 마이크로바이옴 |
다당/올리고당 프리바이오틱 기질 이용능 |
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PreBioM3 |
장내 마이크로바이옴 |
섬유질/식품추출물 프리바이오틱 기질 이용능 |
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EcoPlate |
박테리아(호기성 군집) |
탄소원 이용능 테스트 |
2. 대사 활성 / 성장 측정
PM 분석은 다양한 조건에서의 살아있는 세포의 대사 활성 및 성장을 시각적이고 정량적으로 측정 합니다.
• Redox Dye (Tetrazolium dye) :
세포의 대사 활동이 활발한 경우, 테트라졸리움 염이 환원되어 가시적인 색 변화(보라색)를 일으킵니다.
- 색의 강도는 대사 활동의 정도를 나타냅니다.
- 이는 세포가 특정 조건에서 자원(기질)을 얼마나 잘 사용하고 있는지, 또는 특정 스트레스에 얼마나 잘 적응하고 있는지를 정량적으로 보여줍니다.
• 데이터 측정 :
Odin 시스템(배양기+리더기)은 최대 50 여개의 Microplate 에 대한 각 웰에서의 색 변화(대사 활동) 또는 세포의 농도 변화(성장) 를 특정 시간
간격으로 기록하며, 시간에 따른 변화 양상을 곡선으로 표현합니다.
Redox Dye 를 사용하는 경우 대사 활동을 측정하며, 사용하지 않은 경우 성장을 측정 기록 합니다.
- 곡선의 기울기 : 대사/성장 속도
- 곡선의 최대 값 : 특정 조건에서의 대사 능력
- 곡선의 지연 시간(Lag time): 세포가 특정 조건에 적응하는 데 걸리는 시간
3. 실험 및 분석 (PM Plate)
3-1. 균주 준비
미생물 배양 : 분석할 미생물을 적절한 배지에서 배양하여 충분한 양의 세포를 확보합니다.
세포 현탁액 준비 : 배양한 미생물을 Biolog 사 Inoculating Fluids 에 현탁하여 Biolog 에서 권장하는 매뉴얼에 따라 세포 농도를 조정합니다.
3-2. 플레이트 로딩
준비한 미생물 현탁액과 Redox Dye 를 Biolog 사 플레이트의 각 웰에 분주합니다.
플레이트를 Biolog 사의 Odin 시스템 또는 배양기에 넣습니다.
3-3. Odin 또는 Microplate Reader 로 데이터 수집
Odin 시스템이 시간 경과에 따른 색 변화(대사 활성) / 세포 농도(성장)를 자동으로 측정합니다.
Microplate Reader 를 사용하는 경우, 490nm (대사활성) 와 750 nm (탁도) 에서 측정 합니다.
4. 주요 어플리케이션
Microbial Metabolic Profile (1/2)
Microbial Metabolic Profile (2/2)
Genome-Scale Metabolic Models
Optimize Bioprocess Conditions
Fungal Pathogens and Monitoring Phenotypic Drift in Bacteria
관련자료