Generic HCP ELISA Kit 

CHO l 360-HCP ELISA KITS

Chinese hamster ovary(CHO) 세포주는 바이오의약품 분야에서 가장 널리 사용되는 발현 시스템으로, 치료용 단백질 의약품의 상업적 생산에 있어 안전성이 입증되어 왔습니다. 재조합 방식으로 생산되는 바이오의약품의 안전성을 확보하기 위해, 규제 당국은 높은 민감도와 특이도를 갖춘 HCP 검출 방법을 적용하여 HCP 불순물을 면밀히 모니터링할 것을 요구하고 있습니다. BioGenes 의 CHO | 360-HCP ELISA 는 네 가지 범용(generic) 키트로 구성된 고도화된 범용 HCP 분석법으로, 단일 범용 키트 대비 더 넓은 범위의 CHO-HCP를 커버하도록 설계되었습니다.

 

 

 

 

4가지 타입의 CHO ELISA 키트

 

CHO | 360-HCP ELISA 키트(Type A–D)는 독자적인 분석 설계를 기반으로 하며, 서로 다른 방식으로 준비된 HCP 항원과 두 종류의 동물 종에서 유래한 항체를 적용합니다.

 

•  항원(Antigen):  CHO-K1 및 CHO-S의 모의 발효(mock fermentation)로부터 얻은 HCP를 사용하며, 총 HCP(total HCP) 및 

                     분획 HCP(fractionated HCP) 형태로 준비됩니다.

 

•  특이 항체(Specific antibodies):  염소(goat)와 토끼(rabbit)를 병렬 면역(parallel immunization) 하여 생성됩니다.

 

 

Type	Species	HCP
A	Goat	Total HCP
B	Goat	Fractionated HCP
C	Rabbit	Total HCP
D	Rabbit	Fractionated HCP

 

CHO | 360-HCP ELISA 은 해당 ICH 가이드라인인 ICH Q2(R1)에 따라 BioGenes 사에서 적격성 평가(qualification) 를 수행하였습니다.

 

각 CHO | 360-HCP ELISA 키트(A–D)에 대해 회수율(recovery rate)은 분석법의 작업 범위(working range) 내에서 세 가지 스파이크(spiked) 시료를 사용하여 평가하였으며, 첨가한 항원의 100±30%가 회수되는 것을 허용 기준(acceptance criterion)으로 설정하였습니다.

 

또한 커버리지(coverage)는 고해상도 2D 형광 웨스턴블로팅(high-resolution 2D fluorescent Western Blotting)과 면역친화성 크로마토그래피/2D DIGE(IAC/2D DIGE) 분석 등 최신의 상호보완적(orthogonal) 분석법을 포함한 방법으로 평가하였으며, 해당 CHO|360-HCP 항원에 대해 최대 80% 수준의 커버리지를 달성함을 확인하였습니다.

 

•  LOD :                  ≤ 1.0 ng/mL

•  Working range :     ~2 - 100 ng/mL

 

 

BioGenes 사는 왜 면역화 이전에 HCP 분획화(HCP fractionation)를 적용할까요? 

 

자연적으로 저분자량(LMW) 단백질은 큰 단백질에 비해 면역원성이 낮아, 동물을 면역했을 때 LMW HCP 에 대한 항체(anti-LMW HCP antibodies) 생성이 감소하는 경향이 있습니다. 그 결과, 면역원성이 매우 약하거나(very weakly immunogenic) 면역원성이 없는(non-immunogenic) HCP는 ELISA나 Western blot으로 검출되지 않을 수 있습니다. BioGenes 의 CHO | 360-HCP ELISA 는 동물 면역 시 총 HCP(total HCP) 또는 분획 HCP(fractionated HCP) 를 사용함으로써 이러한 잠재적 한계를 완화하였으며, 그 결과 서로 다른 4종의 HCP ELISA 키트(A–D) 로 구성됩니다.

 

또한 서로 다른 3가지 분자량 분획으로 면역하여 얻은 항체는 다시 풀링(pooled) 되어, 전체 HCP 스펙트럼에 대한 항체 반응성(reactivity) 을 통합하도록 설계되었습니다. 아울러 토끼와 염소를 활용한 면역을 통해 서로 구별되는 항체 패널을 생성할 수 있으며, 이를 통해 맞춤형(customized) 시료에서 HCP 커버리지를 보다 폭넓게 확보할 수 있습니다.

먼저 4종 키트 전체(Starter Set) 를 시험한 후, 희석 직선성(dilution linearity), 정확도(accuracy), 총 커버리지(total coverage) 등 ELISA 핵심 파라미터를 기준으로 가장 성능이 우수한 키트를 선정하여 이후 모든 시험에 사용하는 것을 권장 드립니다.

 

 

 

Generic ELISA 키트 개발(제조) 과정

 

Enhanced 360-HCP ELISA 키트(E.coli, CHO, HEK293)는 일반적으로 다음 단계로 제조됩니다.

 

•  서로 다른 항원 물질을 사용하여, 서로 다른 동물 코호트 및/또는 종(species) 을 면역화

•  각 다클론 항체 세트(polyclonal antibody sets) 의 친화성 정제(affinity purification) 및 생산

•  ELISA 개발, 적격성 평가(qualification) 및 실시간 안정성(real-time stability) 시험

•  즉시 사용 가능한(ready-to-use) ELISA 키트 제조

 

각 키트 타입의 항체는 전체 단백질 프로파일 중 특정 단백질 하위 집합(subset) 에 대해 특이적인 반응성을 보이며, 동일 균주/세포주 내의 다른 단백질들에 대해서는 반응성이 약하거나 거의 없을 수 있습니다. 전체 단백질 집단 중 검출(인식)되는 단백질의 비율을 커버리지(coverage) 라고 합니다.

 

 

 

360-HCP ELISA 의 우수성

 

360-HCP ELISA는 바이오틴 표지 항체를 Streptavidin–POD(Peroxidase) 결합체로 검출하여 재현성 있는 결과를 확보하도록 설계되었습니다. 또한 2단계(two-step) 프로토콜을 적용해 비특이적 결합(nonspecific binding) 을 감소시키고, 표준(stock) 용액을 포함하여 제품 안정성과 운용 유연성을 높였습니다. 아울러 360-HCP ELISA 키트는 자동 플레이트 워셔(automated plate washing) 에 최적화되어, 실험 효율을 향상시킵니다.

 

 

 

가장 적합한 ELISA 키트 선택 시 고려사항 

 

각 의약품 제조 공정은 고유한 HCP(숙주세포단백질) 프로파일을 형성합니다. 따라서 최적의 HCP 모니터링을 위해서는 공정 및 시료에 가장 적합한 키트를 선정하기 위한 적합성 평가(evaluation study) 를 수행하는 것이 바람직합니다. 그림에서 보듯이, 예시 프로젝트 시료에서 Kit 1은 Kit 2에 비해 더 폭넓은 범위의 HCP를 커버(검출)합니다. 따라서 전반적인 커버리지가 더 우수한 Kit 1이 HCP 감소(저감) 모니터링을 수행하는 데 더 적합한 선택이 됩니다.

 

가장 적합한 범용 360 HCP ELISA 키트를 선정하기 위해 BioGenes는 HCP 커버리지, 충분한 HCP 로그 감소(log-reduction), ELISA 정확도(accuracy), 시료 희석 직선성(dilution linearity) 등 핵심 성능 지표를 함께 평가할 것을 권장합니다.

 

 

 

 

이 인포그래픽은 바이오의약품 제조에서 공정에 가장 적합한(best-fit) HCP ELISA 키트를 선정하는 과정을 설명합니다. 각 제조 공정은 고유한 숙주세포단백질(HCP) 프로파일을 생성하므로, 최적의 HCP 모니터링을 위해서는 평가 연구(evaluation study) 가 필요합니다. 본 비교에서 Kit 1은 시료 내 HCP 검출에 대해 Kit 2보다 더 넓은 항체 커버리지를 보여, HCP 저감(HCP reduction) 모니터링에 더 적합한 선택지입니다. BioGenes는 가장 적합한 360 HCP ELISA 키트를 선정하기 위해 HCP 커버리지, 로그 감소(log-reduction), 정확도(accuracy), 시료 희석 직선성(sample dilution linearity) 등 핵심 ELISA 성능 지표를 평가할 것을 권장합니다.

 

 

Category	Product No.	Product Name	Amount per Unit
Starter Set	IP001	CHO360 HCP ELISA Starter Set (Types A, B, C and D)	4 kits
Single Kits	IP101	CHO360 HCP ELISA Type A	1 kit
	IP102	CHO360 HCP ELISA Type B	1 kit
	IP103	CHO360 HCP ELISA Type C	1 kit
	IP104	CHO360 HCP ELISA Type D	1 kit
	IP401	CHO PLBL2 ELISA Kit	1 kit
	IP402	CHO PRDX1 ELISA Kit	1 kit
	IP403	CHO CTSB ELISA Kit	1 kit
Antibodies*	IP111	Anti-CHO antibody Type A	0.5 mg
	IP112	Anti-CHO antibody Type B	0.5 mg
	IP113	Anti-CHO antibody Type C	0.5 mg
	IP114	Anti-CHO antibody Type D	0.5 mg
Standard*	IP120	CHO-HCP Standard	0.25 mg

 

 

 

 

ELISA 키트 포함 품목 :

•  Pre-coated 96-well microtest plate

•  Standard E.coli-HCP

•  Antibody conjugate

•  Enzyme conjugate

•  Washing buffer

•  Assay buffer

•  Substrate buffer

•  Stop solution